Тесты на антибиотики в молоке без инкубатора

Главная / Приборы для определения качества МОЛОКА и МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ / Тесты на определение антибиотиков в молоке / Тесты на антибиотики в молоке без инкубатора / Тест «Калидос МР» для определения остаточного количества антибиотиков, сульфаниламидов и ингибирующих веществ в молоке

Тесты на антибиотики в молоке без инкубатора

Тест «Калидос МР» для определения остаточного количества антибиотиков, сульфаниламидов и ингибирующих веществ в молоке

1. НАЗНАЧЕНИЕ

Неправильное использование антибиотиков в скотоводстве и в производстве кормов может привести к их накоплению в биологических жидкостях и тканях животных. Существуют опасения связанные с потенциальным канцерогенным и генно- токсическим эффектом антибиотиков на организм человека, а также возникновением устойчивой резистентности микроорганизмов к антибиотикам из-за потребления человека пищи, контаминированной этими опасными загрязнителями. Поэтому такие лекарства запрещены для использования в выращивании сельскохозяйственных животных в странах Евросоюза, или же уровень таких лекарств жестко регулируется. Существуют экспресс — тесты предназначенные для выявления опасных контаминантов в продуктах питания. Тест для сырого молока Kalidos (Калидос) имеет высокую чувствительность к широкому спектру антимикробных препаратов, включая антибиотики бета- лактамной, тетрациклиновой и сульфонамидной и др.групп. Принцип его действия основан на ферментации сахара (глюкозы) бактерией bacillus stearothermophilus calidolactis в присутствии индикатора, меняющего свою окраску с фиолетового на желтый. Время, затрачиваемое на анализ – от 2 часов 30 минут до 3 часов.

2. ПРИНЦИП ТЕСТА

Тест Калидос оснащен ампулами, собранными в микропластины, в которых содержится среда агара. Среда агара культивированная спорами bacillus stearothermophilus calidolactis содержит глюкозу и рН- нидикатор бромокрезоловый пурпурный. Тест готов к использованию и не требует предварительной активации и дополнительных реагентов. Для проведения теста нужно всего лишь нанести образец тестируемого молока на поверхность агара и инкубировать тест в течении 2 часов 30 минут до 3 часов в водяной бане, или сухом термостате при температуре 65Со (требуется предварительное термостатирование козьего, овечьего молока). При отсутствии или при незначительном содержании в образце антимикробных субстанций, бактерии начинают развиваться и в процессе роста метаболизируют сахар, превращая его в кислоту. Образовавшаяся кислота меняет цвет индикатора бромокрезолового пурпурного с фиолетового на насыщенный желтый цвет. В присутствии антимикробных субстанций в молоке, развитие спор бактерий ингибируются. В этом случае не произойдет ферментации глюкозы и она не превратиться в кислоту, в результате индикатор среды не поменяет своей первоначальной окраски.

3. КОМПОНЕНТЫ ТЕСТ-НАБОРА

— ампулы, собранные в микропластины, готовые к использованию (4х100); — пипетки объемом 100 мкл -100 шт.;

4. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ Хранить при 4-8 Со (хранение при температуре ниже +4Со — недопустимо); Не использовать тесты, в которых изменилась окраска среды в лунках.

5. ДОПОЛНИТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ НЕВКЛЮЧЕННЫЕ В НАБОР

— водяная баня с крышкой, с поддержанием температуры 65+- 2С; — термостатический блок (термостат) (код EMK 20AGA, Euroclone) — дозаторы на 100 мкл со стерильными наконечниками.

6. ПРОБОПОДГОТОВКА Пробоподготовка молока не требуется. Образцы для исследования: сырое молоко, молоко, подвергнутое тепловой обработке, восстановленное сухое молоко. Сырое молоко должно быть протестировано сразу после доения и сбора. Для анализа может быть использовано козье и овечье молоко.

7. ПОРЯДОК РАБОТЫ

1. Перед проведением анализа доведите температуру исследуемых образцов и ампул теста до комнатной температуры. Нагрейте воду в водной бане до 65Со , достаньте из пакета микропластину о отрежьте от неѐ требуемое количество ампул, снимите с них защитное покрытие из фольги. Оставшиеся ампулы уберите обратно в холодильник.
2. При каждом анализе используйте один или более отрицательных контролей (образцы молока свободные от антибиотиков).
3. При помощи пипетки (дозатора) со стерильными одноразовыми наконечниками, внесите в каждую лунку по 100 мкл образца молока. В целях предотвращения перекрестной контаминации всегда меняйте наконечник дозатора перед забором нового образца. Аккуратно покройте лунки клейкой лентой, или другим гидроизолирующим покрытием. Установите планшет с лунками на водяной бане, или сухом термостате и инкубируйте в течении 2 часов 30 минут до 3 часов при 65С.

Примечание: температура инкубации является важным фактором, влияющим на результат тестирования, поэтому температура водяной бани во время инкубации должна поддерживаться на точно установленном уровне.

8. ИНТЕРПРИТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТА

После инкубации, извлеките планшет с лунками из инкубатора и охладите его в течение 1-2 мин при комнатной температуре, предварительно удалив клейкую ленту. Слегка постучите лунки об фильтровальную бумагу для удаления капель воды. Оцените изменение первоначальной окраски среды в лунках. — Негативный образец и негативный контроль: образцы без антибиотиков и образец с отрицательным контролем — среда в лунках изменила цвет с фиолетового на желтый. — Позитивный образец: образец с антибиотиком — цвет среды не изменился. Если по истечении 3 часов инкубации, лунки с негативным контролем не изменили исходной окраски на ярко- желтый цвет, проверьте температуру инкубатора и продлите процесс инкубации еще на 15 мин. В течение дополнительного времени инкубации проверяйте окраску лунок каждые 5 мин. Пробы, получившие всевозможные комбинации оттенков фиолетового или желтого, будут относиться к сомнительным результатам и должны быть перепроверены другими методами анализа.. Такое может произойти, в случае, когда в образце содержались антибиотики в количестве, не превышающем порог чувствительности теста. Например, положительный образец можно дополнительно протестировать на наличие пенициллинов. Для этого в данный образец вносят известное количество пенициллина и затем тестируют методом микробиологического анализа. Если пенициллин присутствовал, но позже был ликвидирован пеннициллиназой, в таком случае образец нужно считать отрицательным.

9. ПРЕДЕЛ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ* В КОРОВЬЕМ МОЛОКЕ (* Предел чувствительности соответствует минимальному количеству антибиотика в пробе, которое способно ингибировать рост бактерий в условиях анализа. )